A Bécsi Állami Operaház tiszteletbeli kamaraénekese Pozsonyban született és az ottani konzervatóriumban végzett.

Gruberová évtizedeken át szerepelt a világ legnevesebb operaházainak színpadán azután, hogy 1970-ben Bécsben az Éj királynőjeként mutatkozott be 24 évesen Mozart A varázsfuvola című operájában. A Bécsi Állami Operaházban azóta hétszázszor lépett fel különböző operaszerepekben és gálaműsorokban, utoljára 2018-ban.

Rövid időn belül a milánói Scalában, a londoni Covent Gardenben, a New York-i Metropolitan Operában debütálhatott Zerbinetta, Konstanze, Donna Anna, Rosina, Gilda vagy Violetta szerepében, majd a berlini, a müncheni, a genfi, a zürichi és a firenzei közönség is megismerhette páratlan hangját.

Számtalan hangfelvételt készített, leginkább az elmúlt években teljes operákból és bel canto operákból.

Hazájában kitüntették a Fehér kettőskereszt renddel, Bajorország a Bajor Érdemrendet, Ausztria az Osztrák Köztársaság Szolgálatáért kitüntetést adományozta neki. 2013-ban megkapta a Herbert von Karajan zenei díjat.